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【论文一分钟】灵敏度之争 —— MP-SAT VS Real-time PCR

2019-01-08 22:01:00 分类:顶刊鉴析

实时荧光恒温扩增技术(SAT)检测病原体RNA,Real-time PCR技术检测病原体DNA;虽都为核酸检测,但检测靶标不同,那么两种方法临床应用的结果有什么不同呢?


浙江大学医学院附属儿童医院检验科在《PLoS One》发表了Evaluation of a real-time method of simultaneous amplification and testing in diagnosis of Mycoplasma pneumonia infection in children with pneumonia一文, 研究了SAT和实时荧光PCR在诊断肺炎支原体感染的应用价值。

THE FRIST

研究方法:收集2016年2月到4月来院治疗的315例儿童,其中男童202例,女童113例。所有入组患儿均已诊断为肺炎支原体感染且未接受过相关治疗。患儿的年龄介于1个月到10岁之间。患者同时采集血清和咽拭子样本,进行SAT、PCR和IgM-ELISA的检测。
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THE SECEND

研究结果:


一、MP-SAT灵敏度、特异性分析


(1)为确定MP-SAT法的检测范围,将肺炎支原体标准品M129 (ATCC 29342)连续10倍稀释到10~ 107 CFU /ml。采用MP-SAT和实时荧光PCR进行检测。

结果显示,MP-SAT的检测最低浓度可达到101CFU/ml,而实时荧光PCR为102 CFU/ml;说明MP-SAT灵敏度更高,这可能是由于在相同浓度的肺炎支原体中,rRNA浓度水平(拷贝数)高于DNA。此外,MP-SAT的扩增效率比PCR更高(MP-SAT可在一个循环中产生102-103反应产物)。


(2)为评价MP-SAT的特异性,本研究也对于临床上常见的19种呼吸道病原菌进行了检测,包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌等7种细菌,腺病毒、呼吸道合胞体病毒、流感病毒等7种病毒,以及、沙眼衣原体、解脲脲原体、唾液支原体等5种支原体和衣原体。


研究结果显示,MP-SAT法能够特异性地鉴别出肺炎支原体,说明MP-SAT技术特异性高。

  


二、比较分析MP-SAT、实时荧光PCR技术和IgM-ELISA检测结果


在研究期间,对每个儿童进行双样本采集后,对样本进行MP-SAT检测和实时荧光PCR检测。共315个样品,其中咽拭子样本197个,痰标本128个。同时采集每个孩子的血液样本进行IgM抗体检测。


结果显示,MP-SAT、Real-time PCR、IgM-ELISA检测的样本阳性率分别为16.51%、15.56%和12.70%。


其中,MP-SAT与IgM-ELISA比较有统计学差异(P=0.04), IgM法检测阳性率低于MP-SAT,可能是因为IgM检测存在窗口期,造成假阴的结果。


 MP-SAT与Real-time PCR比较无统计学意义(P=0.25)。但有3例Real-time PCR阴性的样本,MP-SAT检测的Ct值分别为20.46、23.22、22.16。考虑到MP-SAT有较高的灵敏度,这三例样本可能低于Real-time PCR的检测下限。

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THE END

结论:

本研究中,MP-SAT检测的靶标是rRNA,由于RNA能够快速分解,因此它相对于DNA更不稳定。由于MP-SAT的扩增产物也是RNA,因此能有效降低实验室污染导致的假阳性。


本研究的结果显示, MP-SAT比Real-time PCR对肺炎支原体(MP)更敏感,其检测最低浓度为101CFU/ml这种优越的灵敏度可能是由于在相同浓度的肺炎支原体中,rRNA浓度水平(拷贝数)高于DNA。此外,MP-SAT的扩增效率比PCR更高(MP-SAT可在一个循环中产生102-103反应产物)。


MP-SAT在鉴别诊断肺炎支原体方面也有较好的特异性,研究对于19种常见呼吸道感染的病原体同时检测,在其他病原体中无交叉反应。

综上所述,MP-SAT是一种检测方便快速(实验时间2-3小时)、灵敏度高、特异性高的检测肺炎支原体的检测技术,MP-SAT值得成为临床医生的有效诊断工具。

尤其适用于早期发现肺炎支原体的感染,可有效提高患儿肺炎支原体的检出率。


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