肺炎支原体(mycoplasma pneumonia,MP)是人类原发性非典型肺炎的主要病原体,更是儿童社区获得性肺炎的首要病原。以往认为MP 肺炎临床症状均较轻,是自限性疾病,预后良好,但也有导致重症肺炎或肺外并发症的可能,并可遗留肺不张、支气管扩张、闭塞性支气管炎及闭塞性细支气管炎等。
MP 肺炎无特异性的临床和影像学表现,明确诊断较困难,分离培养和血清抗体检测由于培养时间长、阳性率低或特异性差,难以成为MP早期诊断的有效手段。以MP 核酸定量为基础的核酸检测技术的检测靶标为DNA,易受到DNA气溶胶污染出现假阳性结果,且不能确定MP 是否有活性。荧光恒温扩增技术(simultaneous amplification and test,SAT)以核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)为靶标,不需要热循环,较传统PCR 法有更高的灵敏度和特异性。另外,由于RNA只存在于增殖存活的病原体内,因此检测结果可以区分活菌和死菌,更适合用于早期诊断,从而有利于临床治疗效果的评估。
为评估SAT技术检测活菌的能力,天津市儿童医院儿科检验所和呼吸科在《中华检验医学杂志》发表了“儿童肺泡灌洗液中肺炎支原体RNA恒温扩增技术检测及临床应用”一文。
文章通过采用RNA 恒温扩增(SAT)技术,对肺炎患儿的肺泡灌洗液标本进行检测,并结合体外培养实验,评估该技术检测活菌的能力,为SAT 技术在肺炎支原体(MP)肺炎诊疗中的应用提供理论支持。
收集天津市儿童医院2015年10月至2017年12月临床确诊为社区获得性肺炎的572例患儿的肺泡灌洗液,利用MP核酸定量和SAT技术检测MP感染情况,并对161份肺泡灌洗液进行分离培养,培养阳性菌液中持续加入高浓度抗生素,同时进行MP核酸定量和SAT技术检测。
通过SAT技术检测活菌的能力的实验发现,MP阳性培养液中连续5d加入5MIC阿奇霉素后,MP核酸定量检测阳性,SAT技术检测则为阴性。
每天向同一株MP培养液中加入不同浓度抗生素,留样进行MP核酸定量和SAT技术检测,MP核酸定量检测结果始终都是阳性,而在每天加入2MIC阿奇霉素的情况下,第2天SAT技术的检测结果变为阴性,同样,在每天加入1MIC和0.5MIC抗生素的情况下,分别在第3天和第4天SAT技术检测结果为阴性,见表3。
SAT技术具有高灵敏度和高特异性,并且可以鉴别“死菌” “活菌”,可以快速准确检测MP感染情况,并能有效评估临床治疗效果。
林书祥, 马百成, 王维, 等. 儿童肺泡灌洗液中肺炎支原体RNA恒温扩增技术检测及临床应用[J]. 中华检验医学杂志, 2018, 41 (10): 770-774.
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