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【论文一分钟】肺支“死菌”“活菌”?SAT让您火眼金睛

2019-10-09 15:19:00 分类:顶刊鉴析

肺炎支原体(mycoplasma pneumonia,MP)是人类原发性非典型肺炎的主要病原体,更是儿童社区获得性肺炎的首要病原。以往认为MP 肺炎临床症状均较轻,是自限性疾病,预后良好,但也有导致重症肺炎或肺外并发症的可能,并可遗留肺不张、支气管扩张、闭塞性支气管炎及闭塞性细支气管炎等。


MP 肺炎无特异性的临床和影像学表现,明确诊断较困难,分离培养和血清抗体检测由于培养时间长、阳性率低或特异性差,难以成为MP早期诊断的有效手段。以MP 核酸定量为基础的核酸检测技术的检测靶标为DNA,易受到DNA气溶胶污染出现假阳性结果,且不能确定MP 是否有活性。荧光恒温扩增技术(simultaneous amplification and test,SAT)以核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)为靶标,不需要热循环,较传统PCR 法有更高的灵敏度和特异性。另外,由于RNA只存在于增殖存活的病原体内,因此检测结果可以区分活菌和死菌,更适合用于早期诊断,从而有利于临床治疗效果的评估。

为评估SAT技术检测活菌的能力,天津市儿童医院儿科检验所和呼吸科在《中华检验医学杂志》发表了“儿童肺泡灌洗液中肺炎支原体RNA恒温扩增技术检测及临床应用”一文。


文章通过采用RNA 恒温扩增(SAT)技术,对肺炎患儿的肺泡灌洗液标本进行检测,并结合体外培养实验,评估该技术检测活菌的能力,为SAT 技术在肺炎支原体(MP)肺炎诊疗中的应用提供理论支持。

研究方法

收集天津市儿童医院2015年10月至2017年12月临床确诊为社区获得性肺炎的572例患儿的肺泡灌洗液,利用MP核酸定量和SAT技术检测MP感染情况,并对161份肺泡灌洗液进行分离培养,培养阳性菌液中持续加入高浓度抗生素,同时进行MP核酸定量和SAT技术检测。

研究结果
01
MP核酸定量和SAT技术检测结果比较
MP核酸定量和SAT技术的MP阳性检出率分别为74.7%(427/572)和71.9%(411/572),两种检测方法具有很高的一致性(χ2=1.142,P=0.285)。以MP核酸定量检测为标准,SAT技术的灵敏度为95.1%(406/427)。两种方法共有26份标本的检出结果不同,其中21份标本在MP核酸定量检测中结果为阳性,而SAT检测结果均为阴性;5份标本在MP 核酸定量检测中结果为阴性,而SAT检测结果均为阳性,见表1。

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SAT技术检测出来的MP阳性率与MP核酸定量检测出来的阳性率一致性高达96.3%(411/427),表明SAT 技术同样具有高灵敏度和高特异性。此外,21份标本在MP 核酸定量检测中结果为阳性,而SAT 检测结果均为阴性。通过查阅患儿病历发现,90.5%(19/21)的患儿病程超过7d,且这21例患儿在接受SAT 技术检测前,全部有过院外或本院门、急诊输液治疗史,提示其SAT阴性结果可能是由于患儿已处于疾病的恢复期,MP-RNA载量降低,RNA减少有关。本研究中SAT技术检出的MP感染率为71.9%,一方面可能是因为本研究标本是肺泡灌洗液,MP阳性检出率本身要比咽拭子、痰等标本高,另一方面这些数据显示儿童MP的感染率越来越高,而这更需要引起医学工作者的重视。


02
SAT技术检出的MP感染率与性别、年龄的关系

根据SAT技术的检测结果,572例肺炎患儿中男性患儿阳性率为72.7%(224/308),女性患儿阳性率为70.8%(187/264),不同性别患儿阳性率差异无统计学意义(χ2=0.252,P=0.616)。不同年龄患儿MP 检出阳性率不同(表2),婴幼儿(≤3岁)阳性率为56.6%(94/166),学龄前期和学龄期儿童(4~14岁)阳性率为78.1%(317/406),学龄前期和学龄期儿童的阳性率明显高于婴幼儿,差异有统计学意义(χ2=26.811,P=0.000)。

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研究结果显示,性别对于MP-SAT的检出率基本无影响,MP感染主要见于4岁以上儿童。此年龄段儿童正处于学龄期,学校等地是人群密集地,儿童免疫力相对较低,容易发生群体感染,此外小于3岁的婴幼儿可能载菌量也比较低,可见大于4岁的学龄期儿童是MP感染的重点防护人群。


03
MP分离培养及MIC结果

本研究共测定了10株MP的MIC,其中2株MP的MIC为128mg/L,3株为64 mg/L,3株为32mg/L,剩余2株的MIC为16mg/L。


04
SAT 技术检测活菌的能力

通过SAT技术检测活菌的能力的实验发现,MP阳性培养液中连续5d加入5MIC阿奇霉素后,MP核酸定量检测阳性,SAT技术检测则为阴性。


每天向同一株MP培养液中加入不同浓度抗生素,留样进行MP核酸定量和SAT技术检测,MP核酸定量检测结果始终都是阳性,而在每天加入2MIC阿奇霉素的情况下,第2天SAT技术的检测结果变为阴性,同样,在每天加入1MIC和0.5MIC抗生素的情况下,分别在第3天和第4天SAT技术检测结果为阴性,见表3。

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MP阳性培养液中连续5d加入5MIC阿奇霉素,同时进行MP-DNA(MP核酸定量)和MP-RNA(SAT 技术)检测,结果MP-DNA检测阳性,MP-RNA检测阴性,实验证明SAT技术可以区分“死菌”“活菌”,此后进行的动态检测实验结果(表3),进一步证实上述结论。


总结

SAT技术具有高灵敏度和高特异性,并且可以鉴别“死菌” “活菌”,可以快速准确检测MP感染情况,并能有效评估临床治疗效果。



参考文献:

林书祥, 马百成, 王维, 等. 儿童肺泡灌洗液中肺炎支原体RNA恒温扩增技术检测及临床应用[J]. 中华检验医学杂志, 2018, 41 (10): 770-774.



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