【论文一分钟】肺支“死菌”“活菌”？SAT让您火眼金睛

2019-10-09 15:19:00 分类：顶刊鉴析

肺炎支原体（mycoplasma pneumonia，MP）是人类原发性非典型肺炎的主要病原体，更是儿童社区获得性肺炎的首要病原。以往认为MP 肺炎临床症状均较轻，是自限性疾病，预后良好，但也有导致重症肺炎或肺外并发症的可能，并可遗留肺不张、支气管扩张、闭塞性支气管炎及闭塞性细支气管炎等。

MP 肺炎无特异性的临床和影像学表现，明确诊断较困难，分离培养和血清抗体检测由于培养时间长、阳性率低或特异性差，难以成为MP早期诊断的有效手段。以MP 核酸定量为基础的核酸检测技术的检测靶标为DNA，易受到DNA气溶胶污染出现假阳性结果，且不能确定MP 是否有活性。荧光恒温扩增技术（simultaneous amplification and test，SAT）以核糖体RNA（ribosomal RNA，rRNA）为靶标，不需要热循环，较传统PCR 法有更高的灵敏度和特异性。另外，由于RNA只存在于增殖存活的病原体内，因此检测结果可以区分活菌和死菌，更适合用于早期诊断，从而有利于临床治疗效果的评估。

为评估SAT技术检测活菌的能力，天津市儿童医院儿科检验所和呼吸科在《中华检验医学杂志》发表了“儿童肺泡灌洗液中肺炎支原体RNA恒温扩增技术检测及临床应用”一文。

文章通过采用RNA 恒温扩增（SAT）技术，对肺炎患儿的肺泡灌洗液标本进行检测，并结合体外培养实验，评估该技术检测活菌的能力，为SAT 技术在肺炎支原体（MP）肺炎诊疗中的应用提供理论支持。

研究方法

收集天津市儿童医院2015年10月至2017年12月临床确诊为社区获得性肺炎的572例患儿的肺泡灌洗液，利用MP核酸定量和SAT技术检测MP感染情况，并对161份肺泡灌洗液进行分离培养，培养阳性菌液中持续加入高浓度抗生素，同时进行MP核酸定量和SAT技术检测。

研究结果

MP核酸定量和SAT技术检测结果比较

MP核酸定量和SAT技术的MP阳性检出率分别为74.7％（427/572）和71.9％（411/572），两种检测方法具有很高的一致性（χ2＝1.142，P＝0.285）。以MP核酸定量检测为标准，SAT技术的灵敏度为95.1％（406/427）。两种方法共有26份标本的检出结果不同，其中21份标本在MP核酸定量检测中结果为阳性，而SAT检测结果均为阴性；5份标本在MP 核酸定量检测中结果为阴性，而SAT检测结果均为阳性，见表1。

SAT技术检测出来的MP阳性率与MP核酸定量检测出来的阳性率一致性高达96.3％（411/427），表明SAT 技术同样具有高灵敏度和高特异性。此外，21份标本在MP 核酸定量检测中结果为阳性，而SAT 检测结果均为阴性。通过查阅患儿病历发现，90.5％（19/21）的患儿病程超过7d，且这21例患儿在接受SAT 技术检测前，全部有过院外或本院门、急诊输液治疗史，提示其SAT阴性结果可能是由于患儿已处于疾病的恢复期，MP-RNA载量降低，RNA减少有关。本研究中SAT技术检出的MP感染率为71.9％，一方面可能是因为本研究标本是肺泡灌洗液，MP阳性检出率本身要比咽拭子、痰等标本高，另一方面这些数据显示儿童MP的感染率越来越高，而这更需要引起医学工作者的重视。

SAT技术检出的MP感染率与性别、年龄的关系

根据SAT技术的检测结果，572例肺炎患儿中男性患儿阳性率为72.7％（224/308），女性患儿阳性率为70.8％（187/264），不同性别患儿阳性率差异无统计学意义（χ2＝0.252，P＝0.616）。不同年龄患儿MP 检出阳性率不同（表2），婴幼儿（≤3岁）阳性率为56.6％（94/166），学龄前期和学龄期儿童（4～14岁）阳性率为78.1％（317/406），学龄前期和学龄期儿童的阳性率明显高于婴幼儿，差异有统计学意义（χ2＝26.811，P＝0.000）。

研究结果显示，性别对于MP-SAT的检出率基本无影响，MP感染主要见于4岁以上儿童。此年龄段儿童正处于学龄期，学校等地是人群密集地，儿童免疫力相对较低，容易发生群体感染，此外小于3岁的婴幼儿可能载菌量也比较低，可见大于4岁的学龄期儿童是MP感染的重点防护人群。

MP分离培养及MIC结果

本研究共测定了10株MP的MIC，其中2株MP的MIC为128mg/L，3株为64 mg/L，3株为32mg/L，剩余2株的MIC为16mg/L。

SAT 技术检测活菌的能力

通过SAT技术检测活菌的能力的实验发现，MP阳性培养液中连续5d加入5MIC阿奇霉素后，MP核酸定量检测阳性，SAT技术检测则为阴性。

每天向同一株MP培养液中加入不同浓度抗生素，留样进行MP核酸定量和SAT技术检测，MP核酸定量检测结果始终都是阳性，而在每天加入2MIC阿奇霉素的情况下，第2天SAT技术的检测结果变为阴性，同样，在每天加入1MIC和0.5MIC抗生素的情况下，分别在第3天和第4天SAT技术检测结果为阴性，见表3。

MP阳性培养液中连续5d加入5MIC阿奇霉素，同时进行MP-DNA（MP核酸定量）和MP-RNA（SAT 技术）检测，结果MP-DNA检测阳性，MP-RNA检测阴性，实验证明SAT技术可以区分“死菌”“活菌”，此后进行的动态检测实验结果（表3），进一步证实上述结论。

总结

SAT技术具有高灵敏度和高特异性，并且可以鉴别“死菌” “活菌”，可以快速准确检测MP感染情况，并能有效评估临床治疗效果。

参考文献：

林书祥, 马百成, 王维, 等. 儿童肺泡灌洗液中肺炎支原体RNA恒温扩增技术检测及临床应用[J]. 中华检验医学杂志, 2018, 41 (10): 770-774.

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